Conţinut
Electroforeza pe gel de agaroză este o procedură științifică utilizată în proiectele de cercetare și diagnostice care implică studiul acizilor nucleici. Acesta permite omului de știință sau tehnicianului să separe moleculele de acid nucleic încărcate, cum ar fi ADN-ul, în funcție de mărimea lor, și este folosit pentru a analiza produsele generate de experiment, cum ar fi reacția în lanț a polimerazei. Este folosit în mod obișnuit deoarece este ieftin să se execute, să se proceseze rapid și să se permită recuperarea acidului nucleic analizat.
Realizarea gelului
Strângeți toate elementele necesare și curățați-le cu etanol 70%. Elementele includ tava turnată cu gel, bandă adezivă, agaroză de laborator, flacoane sau cilindri, concentrație de 10x (tris-borat-EDTA, TBE), bromură de etidiu, colorant și proba de analizat. De asemenea, asigurați-vă că aveți un rezervor de electroforeză cu gel și o sursă de alimentare. Agaroza se prepară prin cântărirea cantității corespunzătoare de bandă ADN care urmează să fie analizată, amestecând-o cu tamponul TBE și topind în cuptorul cu microunde. În general, o soluție de 1% până la 2% este suficientă pentru a acoperi multe linii ADN studiate în biologia moleculară zilnică. ADN-urile mici necesită geluri mai concentrate, în timp ce cele mai mari necesită geluri mai diluate. Soluția de agaroză este amestecată cu bromură de etidiu, care se va lega de acidul nucleic în timpul procedurii de electroforeză. Această soluție este turnată în tava de topire a gelului, așa cum se introduce un pieptene de turnare și amestecul este lăsat să se solidifice.
Introduceți și activați gelul
Gelul este îndepărtat din tavă și scufundat într-un rezervor de electroforeză cu gel conținând tampon de alergare. Probele care urmează să fie analizate sunt amestecate cu coloranți și plasate în godeuri în gelul creat de pieptene. De asemenea, este inclus un marker sau o scală care să permită cercetătorului să vadă evoluția electrophoresei și să determine mărimea fragmentelor generate. Se aplică apoi un curent electric pe gel, care forțează eșantionul să migreze de la un capăt al gelului la celălalt. În timpul acestui proces, acizii nucleici din eșantion se separă în fragmente de dimensiuni diferite, moleculele mai mari se apropie de puț și moleculele mai mici se deplasează către celălalt capăt al gelului.
Analizați gelul
După terminarea procedurii de electroforeză, gelul este îndepărtat din rezervor și plasat într-un transiluminator UV, care iluminează fragmentele de acid nucleic care se leagă la bromura de etidiu fluorescentă. O fotografie a acestui lucru se face și benzile de acizi nucleici pot fi măsurate în funcție de distanța care a migrat prin gel. Scara îi va separa în benzi de dimensiuni cunoscute și poate fi utilizată pentru a ghida cercetătorul în timpul analizei.