Conţinut
Tuberculoza este o boală infecțioasă cauzată de bacteria Mycobacterium tuberculosis și este o boală respiratorie caracterizată prin formațiuni de tuberculi, necroză, abcese, fibroză și calcificare în plămâni. De asemenea, poate infecta rinichii, ganglionii limfatici, oasele, articulațiile și pielea.
Diagnosticul principal de laborator al acestui bacil implică colorarea acestuia pentru a vizualiza bacteriile la microscop. Eșantionul ales este sputa sau spălarea bronhoalveolară pentru a identifica infecția respiratorie sau o probă de țesut propriu-zis.
Fiziologie
Mycobacterium tuberculosis este un organism în formă de tijă (bacili), spori nemobile, neobligatori. Această bacterie măsoară 0,4x3 micrometri în lungime și suferă fisiune binară (divizarea celulei reproductive) la fiecare 15 până la 24 de ore, ceea ce este considerat lent în comparație cu alte bacterii. Din această cauză, micobacteriile pot dura până la nouă săptămâni pentru a apărea în mediul de cultură.
Acest organism este sensibil la lumina UV și la căldură (cum ar fi pasteurizarea), dar rezistă la dezinfectanții chimici.
Pata Gram
Mycobacterium tuberculosis nu poate fi clasificat cu adevărat ca gram-pozitiv sau gram-negativ. Această clasificare se face pe baza cantității de peptidoglican din peretele celular al unei bacterii. O specie gram-pozitivă are un strat gros al acestei molecule (aproximativ 90%), în timp ce o specie gram-negativă are un strat subțire (de la 5% la 20%). Petele Gram pătrund în peretele celular și se leagă de componentele chimice din acesta. La microscop, bacteriile colorate vor deveni violet sau roz.
Cu mycobacterium tuberculosis, peretele celular este compus din peptidoglican, dar și lipide complexe care inhibă penetrarea gram coloranților. Peretele celular rezistă, de asemenea, la decolorare prin acid sau alcool, motiv pentru care micobacteria este numită „rezistentă la acid”. Lipidele peretelui celular sunt acidul micolic, factorul de șir și ceara D. Dacă bacteriile ar fi colorate, celulele ar părea gram-pozitive sau ușor palide, cu foarte puțină culoare.
Pentru a vedea bacteriile, trebuie folosite pete speciale, cum ar fi pata Aumarine sau Zhiel-Neelson.
Pata de aumarină-rodamină
Procesul care utilizează auramină-rodamină folosește un colorant fluorescent galben pentru a vizualiza mycobacterium tuberculosis la microscopul cu fluorescență. Permanganatul de potasiu sau portocaliul acridinic pot fi utilizate ca colorant de contrast. Sub lentilă, celulele bacteriene vor apărea verzi.
Colorantul auramină-rodamină este mai sensibil decât Zhiel-Neelson și mai viabil din punct de vedere economic.
Colorare Ziehl-Neelson
Pata Ziehl-Neelson a fost creată de oamenii de știință Franz Ziehl și Friedrich Neelsen și folosește carbol-fuchsin încălzit, o concentrație mare de acid-alcool și un colorant de contrast, cum ar fi malachitul verde sau albastrul de metilen. La microscopul cu fluorescență, celulele bacteriene vor apărea roz aprins.
Vopseaua Ziehl-Neelson este standardul de excelență pentru identificarea preliminară a mycobacterium tuberculosis și mycobacterium leprae.
Agar
Secundar identificării microscopiei, mycobacterium tuberculosis trebuie cultivat pe o cultură specială de agar. Gelatina Lowenstein-Jensen are substanțe organice complexe (precum ouă și cartofi), săruri, glicerol și verde de malachit (care inhibă alte bacterii). Se pot adăuga antibiotice pentru a inhiba în continuare microorganismele contaminante. Proba este plasată pe acest agar, iar bacteriile cresc în trei până la nouă săptămâni.
O soluție de cultură a nutrienților, cum ar fi albumina și biotina, poate fi utilizată pentru a sprijini dezvoltarea chiar și a celei mai mici cantități de bacterii țintă. Acest lucru este cunoscut sub numele de Middlebrook 7H9 (sau 7H12).
În ambele medii, coloniile vor apărea ca colonii mici, lustruite, de culoare maro deschis.
Cu o tehnologie avansată, mycobacterium tuberculosis poate fi acum cultivat cu ajutorul unui cititor automat. O soluție lichidă de mediu Middlebrook 7H9 și un compus indicator fluorescent sunt utilizate pentru a monitoriza creșterea și a raporta infecția pozitivă sau negativă.